3.結果

3.1.24小時暴露實驗

3.1.1.D形幼蟲階段

在24°C下，D形幼蟲在對照處理（13.1%）和不含H?S的低氧處理（14.9%）中的平均存活率較低（圖3a）。將D形幼蟲暴露于低氧加H?S導致平均存活率進一步下降，在0.1 mg/L H?S時為2.0%，在2.0 mg/L和10.8 mg/L H?S時為0%（圖3a）。發現低氧處理與2.0 mg/L或10.8 mg/L H?S加低氧處理之間的平均存活率存在顯著差異（Tukey-Kramer檢驗,P<.05；圖3a）。

圖3. 菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）人工受精獲得的幼蟲或稚貝在三種溫度處理下進行24小時暴露實驗后的存活率均值（實心圓）和標準差（垂直線）。幼蟲或稚貝暴露于對照處理（Ctl；溶解氧[DO] > 6 mg/L）、低氧處理（Hyp；DO < 0.5 mg/L）或含不同濃度硫化氫（H?S）的低氧水。橫軸下方數字表示H?S濃度[mg/L]。各面板中不同字母表示Tukey-Kramer檢驗在P < 0.05水平上存在顯著差異。SL，殼長。

3.1.2.殼頂幼蟲階段

在殼頂幼蟲階段，20°C下平均存活率在38.2%到83.4%之間；處理間未檢測到顯著差異（圖3b）。在24°C和28°C下，低氧處理的平均存活率顯著高于對照（Tukey-Kramer檢驗,P<.05；圖3c和d）。將殼頂幼蟲暴露于低氧加H?S導致平均存活率顯著下降（Tukey-Kramer檢驗,P<.05），與單獨暴露于低氧相比：在24°C下，H?S濃度為0.3、1.6和6.6 mg/L時，存活率分別為58.9%、11.7%和0.9%（圖3c）。在28°C下，幾乎所有殼頂幼蟲在低氧加H?S處理后死亡；即使在最低濃度（0.3 mg/L）的H?S下，也只有0.3%的幼蟲存活（圖3d）。

3.1.3.殼頂至完長過渡期幼蟲階段

在所有溫度條件下，殼頂至完長幼蟲在對照、低氧以及H?S（范圍0.2-6.7 mg/L）加低氧處理之間的平均存活率均未檢測到顯著差異（圖3e-g）。20°C時平均存活率較高（90.1%-99.5%），而在24°C（51.8%-85.6%）和28°C（31.8%-94.1%）時則較低。

3.1.4.完長幼蟲階段

盡管完長幼蟲階段的H?S濃度范圍（2.6-28.8 mg/L）與早期階段相比顯著提高，但在所有溫度條件下，與早期階段相比，平均存活率明顯提高（圖3h-j）。在20°C下，大多數幼蟲在所有處理中存活：即使在最高H?S濃度26.5 mg/L下，平均存活率也達到97.7%（圖3h）。在24°C下，暴露于低氧加中等（14.0 mg/L）或高（28.8 mg/L）濃度H?S時，觀察到平均存活率顯著下降（與對照相比）；在28°C下，暴露于低氧加中等（13.7 mg/L）或高（26.9 mg/L）濃度H?S時（與對照或低氧處理或低劑量H?S加低氧相比），也觀察到平均存活率顯著下降（Tukey-Kramer檢驗,P<.05；圖3i和j）。然而，在24°C下暴露于低氧加28.8 mg/L H?S 24小時后，平均存活率仍保持較高水平（73.9%）（圖3i），并且在28°C下暴露于低氧加26.9 mg/L H?S 24小時后，仍有40.0%的幼蟲存活（圖3j）。

3.1.5.稚貝

我們在20°C和24°C下進行24小時暴露實驗期間，未發現小規格稚貝（平均殼長0.7毫米）死亡（Tukey-Kramer檢驗,P>.05；圖3k和l）。在28°C下暴露于低氧加中等（15.3 mg/L時存活率61.3%）或高（29.3 mg/L時存活率16.7%）濃度H?S 24小時后，平均存活率顯著下降（與對照或低氧處理或低劑量H?S加低氧相比）（Tukey-Kramer檢驗,P<.05；圖3m）。

我們使用中等和大規格稚貝（平均殼長2.5毫米和5.3毫米）在24°C下進行了24小時暴露實驗。與對照相比，以及通常與低氧處理相比，暴露于低氧加中等（16.2 mg/L時存活率70.0%）或高（32.2 mg/L時存活率53.3%）濃度H?S后，中等規格稚貝的平均存活率顯著下降；暴露于低氧加中等（21.2 mg/L時存活率46.7%）或高（42.6 mg/L時存活率53.3%（或26.7%））濃度H?S后，大規格稚貝的平均存活率也顯著下降（Tukey-Kramer檢驗,P<.05；圖3n和o）。

我們還使用從六條潮灘采集的野生稚貝進行了24小時暴露實驗（圖4）。在所有溫度條件下，暴露于低氧加中等或高濃度H?S后，6.9毫米殼長的野生稚貝的平均存活率顯著下降（與對照或低氧處理或低劑量H?S加低氧相比）（圖4a-c）。當稚貝暴露于較高水溫時，存活率下降的程度更大：在最高H?S濃度暴露下，20°C、24°C和28°C時的存活率分別為33.3%、10.0%和0%（圖4a-c）。

圖4. 日本三河灣六條潮灘野生菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）稚貝在三種溫度處理下進行24小時暴露實驗后的存活率均值（實心圓）和標準差（垂直線）。幼蟲或稚貝暴露于對照處理（Ctl；溶解氧[DO] > 6 mg/L）、低氧處理（Hyp；DO < 0.5 mg/L）或含不同濃度硫化氫（H?S）的低氧水。橫軸下方數字表示H?S濃度[mg/L]。各面板中不同字母表示Tukey-Kramer檢驗在P < 0.05水平上存在顯著差異。SL，殼長。

我們還發現，較大規格的野生稚貝（11.9毫米殼長）在20°C下暴露于低氧加中等（15.0 mg/L時存活率56.7%）或高（30.2 mg/L時存活率16.7%）濃度H?S 24小時后，或在24°C下暴露于低氧加中等（14.9 mg/L時存活率10.0%）或高（30.7 mg/L時存活率3.3%）濃度H?S 24小時后，平均存活率顯著下降（與對照或低氧處理相比）（圖4d和e）。暴露于低濃度H?S加低氧后未發現明顯下降（20°C下3.0 mg/L時存活率100%；24°C下3.5 mg/L時存活率80%）（圖4d和e）。水溫升高至28°C導致平均存活率進一步下降；在此溫度下，不僅暴露于低氧加中等或高濃度H?S后（16.8 mg/L時存活率3.3%，34.4 mg/L時存活率0%），而且暴露于低氧加低濃度H?S后（3.5 mg/L時存活率20.0%；Tukey檢驗,P<.05；圖4f），平均存活率均出現實質性下降。

3.2.長時間暴露于H?S（連續和間歇）的影響

我們在24°C下使用通過人工授精獲得的稚貝（0.8毫米殼長）或從六條潮灘野外采樣獲得的稚貝（11.3毫米殼長）進行了48小時暴露實驗。在這兩個實驗中，對照和低氧處理中均未出現死亡，而在人工孵化稚貝暴露于低氧加2.5 mg/L H?S 48小時后，或在野生稚貝暴露于低氧加4.2 mg/L H?S 48小時后，平均存活率顯著下降至46.7%（Tukey-Kramer檢驗,P<.05；圖5a和b）。在≥12.6 mg/L（人工孵化稚貝）或≥28.1 mg/L（野生稚貝）的H?S濃度下暴露48小時后，沒有個體存活（圖5a和b）。

圖5. 菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）人工受精(a)或日本三河灣六條潮灘野生幼體(b)中48小時暴露實驗后的存活率均值（實心圓）和標準差（垂直線）。幼體分別暴露于對照處理（Ctl；溶解氧[DO] > 6 mg/L）、低氧處理（Hyp；DO < 0.5 mg/L）或含不同濃度硫化氫（H?S）的低氧水。間歇性暴露實驗結果亦見圖示(c)：幼體先暴露于低氧加H?S 24小時，隨后在常氧條件下休息24小時，再重復低氧加H?S暴露24小時。橫軸下方數字代表H?S濃度[mg/L]。各圖中不同字母表示Tukey-Kramer檢驗在P < 0.05水平上存在顯著差異。SL，殼長。

在48小時間歇暴露實驗中，在第一次24小時暴露于低氧加H?S期間以及隨后24小時在常氧條件下的休息期間，均未發生死亡。在第二次24小時暴露后，對照和低氧處理中均無死亡，但在低氧加11.9或24.8 mg/L H?S處理中，所有稚貝均死亡（圖5c）。當稚貝暴露于低劑量（2.5 mg/L）H?S加低氧時，平均存活率也顯著下降（至73.3%）（圖5c）。